黑龙江农业经济职业学院技能大赛
制药工程学院微生物技术及应用技能大赛
一、活动目的
基于以就业为导向、以学生为主体、以培养学生综合职业能力为核心的职业教育的培养目标，并结合省内职业技能大赛的开展，从制药专业职业岗位对实用型人才的综合职业能力和职业素质的要求出发，特举办微生物技术及应用技能大赛。本次竞赛的宗旨是提高学生的动手实践能力，增强学生的竞争意识、激发学生学习热情，充分调动广大同学的积极性和主动性，培养学生严谨的学习态度、科学的研究方法，提高学生实践技能，现起草微生物实践技能竞赛具体考核方案如下：
二、比赛时间
比赛时间： 2014年12月3日
比赛地点：实训中心微生物发酵实训室（4101）
三、大赛组织
活动名称：微生物技术及应用技能大赛
主办单位：制药工程学院团总支
生物制药技术专业团队
承办单位：实训中心
组委会组成：主 任：吴英
副主任：宫丽萍
委 员：赵立斐、刘春兰
评 委：赵立斐、刘春兰、于玲玲、白玲玲、黄鑫、魏明斌
四、参赛对象
制药工程系14级学生
五、竞赛内容
（一）初选：
初赛采取自由报名的形式，由任课教师在班级或各个专业内进行选拔，初赛考核内容由主办教师选定。要求教师选拔出来的学生具有基本的实验技能，在班级其实验技能较为突出。
（二）比赛：
比赛内容
现有两微生物样品，由于标签破损，无法区分，只知道是大肠杆菌和金黄色葡萄球菌中的一种。请在不污染样品的前提下进行革兰氏染色鉴定，区分样品种类。
操作要求
（1）无菌操作正确合理，样品无污染；
（2）菌涂片的制作正确，操作规范；
（3）革兰染色步骤正确无误；
（4）正确使用显微镜观察染色结果；
（5）显微镜下观察到染色结果后，立即举手提交裁判员观察，要求：视野均匀，明暗合适，对比度合适，染色结果正确清晰；
（6）染色报告（结果报告单）简明准确；
（7）操作完毕整理台面，物品放回指定位置。
准备通知单见表1、2。
表1 试剂与材料准备
序号
名称
规格
数量
备注
1
金黄色葡萄球菌、大肠杆菌培养物
支
各1
无标注
2
无菌生理盐水
瓶
3
结晶紫染液
4
番红染液
5
95%乙醇
6
碘液
7
滤纸
包
8
酒精棉球
表2 工具、设备准备
普通光学显微镜
台
酒精灯
个
载玻片
片
浸泡乙醇中
接种环
火柴
镊子
记号笔
烧杯
装垃圾用
9
洗瓶
蒸馏水
10
玻璃棒
11
废液缸
纱布
块
表3革兰氏染色结果报告单（参赛考生用）
班 级：
记录人：
日 期：
注：结果报告单不得有任何考生个人、学校信息的暗示，违者以作弊处理。
表4革兰氏染色评分标准
项目
考核内容
分值
考核记录
得分
准备 ( 2分)
物品摆放
物品摆放合理，得1分
摆放的物品影响操作，扣0.5分
未用酒精擦手及台面，扣0.5分
处理载玻片
正确，得1分
不正确，扣1分
革兰氏染色（14分）
接种环的使用（灼烧灭菌、冷却、取菌、灼烧多余菌液）
操作正确, 得2分
接种环灼烧不彻底，一次扣0.5分
灼烧后接种环未冷却直接取菌，一次扣0.5分
取菌时将培养基划破，一次扣0.5分
涂片后未灼烧多余菌液，一次扣1分
涂片（滴加无菌生理盐水、涂片、干燥）
操作正确，得2分
涂片区域及大小不适合，扣1分
盐水多扣0.5分，漏液在桌面扣0.5分
固 定
操作正确，得1分
未在外焰区来回3~5次，扣1分
初 染（时间、漏液）
媒 染（时间、漏液）
脱 色（时间、漏液）
不正确，酌情扣分
复 染（时间、漏液）
水洗、干燥
镜检
熟练，得4分
较熟练，得3分
一般，得2分
不熟练，得1分
结果（4分）
结果
正确，得3分
不正确，扣3分
超时
20分钟完成
每超时1分钟扣1分
评判专家签字： 年 月 日
表5革兰氏染色评分标准细则
要求与评分细则
1.实验着装、试验器材准备及灭菌
着工作服顺序正确，仪容整洁；各染色液按染色顺序排好；染色盆、染色架及洗瓶放在桌子的一边；试管架放置左手边；接种环和菌种摆放在试管架上；酒精灯放中间；火柴及载玻片放置右手边；其它器材摆放在使用方便的位置；所有物品布局合理；以酒精棉球擦拭双手；用镊子取用酒精棉，摊展后全面、仔细擦拭手心手背，以及指间。待手上酒精基本干燥后再做下一步操作。
2.标本片 的制备
用镊子取出载玻片，纱布擦干载玻片，点燃酒精灯；载玻片准备涂菌面酒精灯外焰烤干备用；持接种环，火焰灭菌；滴加生理盐水置于载玻片中央位置；接种环火焰灭菌；在酒精灯外焰直径10cm内操作钩取适量菌落或菌苔；置于生理盐水中凃开，做直径1cm左右的菌膜，薄厚均匀；接种环火焰灭菌，置于试管架上。
3.干燥
标本片烘干。
4.固定
将干燥好的涂片涂面向上在酒精灯外焰上以钟摆的速度来回通过3～4次；用酒精灯盖熄灭酒精灯。
5.革兰氏染色
①初染：在固定好的标本片上加草酸铵结晶紫，量以覆盖菌膜为宜，染色3min，水洗。
②媒染：滴加革兰氏碘液覆盖菌膜，染色2min，水洗。
③脱色：滴加95%乙醇2～3滴于涂片上，频频摇晃3～5s后，倾去酒精，再滴加酒精，如此反复2～5次，直至流下的酒精无色或稍呈浅紫色为止；水洗。
④复染：滴加石炭酸复红覆盖菌膜，染色1min，水洗。
⑤滤纸完全吸干，滴加香柏油1～2滴镜检。
6.显微镜
使用
显微镜的安置，显微镜接通电源并调节光源，固定标本片并调节将观察部分对准物镜，选择物镜，低倍物镜观察，高倍镜观察，还镜
7.染色结果报告
准确填写实验报告单，染色结果表述为革兰氏阳性球菌或革兰氏阴性中等大小杆菌。
视野中细菌适量（不过多或过少不易观察）；葡萄球菌染成蓝色或蓝紫色、杆菌染成红色。在20min内完成，超出1分钟扣1分。
文明操作，无器械掉落及破损，器械整理安静有序并放回指定位置
六、活动流程
本届比赛分为筹备与宣传、集中报名、初赛、决赛四个阶段。具体安排和要求如下：
（一）准备期
1、宣传： 各专业班级宣传
2、材料准备：实训中心微生物发酵实训室提供
（二）活动期
1、赛前培训。
2、实践操作大赛。
（三）活动后期
1、利用网站、海报等媒体公布比赛结果。
2、证书颁发。
七、评奖办法
比赛设一等奖2名，二等奖3名，三等奖5名，优秀奖10名。
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